二氧化碳培養箱控制二氧化碳的濃度是通過二氧化碳濃度傳感器來進行的。二氧化碳傳感器用來檢測箱體內二氧化碳濃度，將檢測結果傳遞給控制電路及電磁閥等控制器件，如果檢測到箱內二氧化碳濃度偏低，則電磁閥打開，二氧化碳進入箱體內，直到二氧化碳濃度達到所設置濃度，此時電磁閥關閉，箱內二氧化碳切斷，達到穩定狀態。二氧化碳采樣器將箱內二氧化碳和空氣混合后的氣體取樣到機器外部面板的采樣口，以隨時用二氧化碳濃度測定儀來檢測二氧化碳的濃度是否達到要求。
目前大多數的二氧化碳培養箱是通過增濕盤的蒸發作用產生濕氣的(其產生的相對濕度水平可達95%左右，但開門后濕度恢復速度很慢)。因為濕度蒸發面積越大，越容易達到相對飽和濕度并且開關門后的濕度恢復的時間越短。所以濕度蒸發面積大的培養箱較濕度蒸發面積小的培養箱容易保持相對飽和濕度。
有的產品在出廠前已完成溫度校準工作，校準部件均安裝在箱內的控制板上，用戶不宜再作調整。對于面板上有校準微調的產品，可在接近培養溫度下(如37℃)，取一根精密溫度計置于箱內，待溫度穩定后觀察溫度計指示值，如與顯示值不跗，調整微調使其相附即可。
溫度的校準步驟：
①在培養箱內放置一個準確的玻璃管式水銀溫度計，以校準所設定溫度。同時，再放置一個準確的體溫計，以校準極限溫度。
②把溫度旋鈕調到所需溫度37℃。
③把極限溫度旋鈕調到最高。等待24小時，讓機器達到穩定。
④如果溫度還沒達到37℃，再調整溫度旋鈕到37℃，然后再等待24小時，讓機器最后達到穩定。
⑤當培養箱穩定在37℃后，按逆時針方向轉動極限溫度旋鈕，直到該極限溫度旋鈕的指示燈明亮為止。
⑥再小心地把極限溫度旋鈕順時針方向轉動，直到指示燈剛好熄滅為止。
注意:機器正常運轉期間，其極限溫度指示燈應保持熄滅狀態。當箱內溫度高于極限溫度時，該指示燈點亮報警。如果面板液晶顯示溫度與箱內溫度計讀數不符，可進一步調整校準。首先，調整顯示器點，直到讀數與水銀溫度計的讀數相吻合，然后，等待數小時，讓機器穩定。如果還不相符，可重復上一步驟，直到機器達到最終穩定。
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